Bir mikropipet, mikrolitre aralığında sıvı hacimlerini doğru ve hassas bir şekilde aktarmak için kullanılan yaygın bir laboratuvar aletidir. Mikropipetlerin tek kanallı ve çok kanallı varyantları mevcuttur. Tek kanallı mikropipetler moleküler biyoloji, mikrobiyoloji, immünoloji, hücre kültürü, analitik kimya, biyokimya ve genetik ile ilgili araştırmalar yapan laboratuvarlarda kullanılırken, çok kanallı mikropipetler ELISA (diagnostic test), moleküler tarama, kinetik çalışmalar ve DNA için önerilir.
Mikropipetin Bileşenleri
Mikropipetler farklı tasarım ve boyutlarda mevcuttur. Ancak, tüm mikropipetlerde temel ve ortak olan belirli bileşenler vardır. Bunlara piston, dijital ekran, uç konisi, uç çıkarıcı ve kavrama dahildir. Bazı mikropipetlerde, bir kalibrasyon aracı ve aksesuar olarak bir mikropipet standı bulunur.
- Sıvı aspirasyonu/dağıtım:Sıvıyı aspire etmek veya dağıtmak için pistona basın ve bastırın.
- Uç İtici:Mikropipetin iç mekanizması numune/sıvı ile doğrudan temas etmez. Bunun yerine, sıvıyı mikropipet içine çekmek ve dağıtmak için tek kullanımlık bir pipet ucu kullanılır. Bu nedenle, uçların güvenli, zahmetsiz ve hızlı bir şekilde çıkarılmasına izin vermek için mikropipetlere bir uç çıkarma sistemi sağlanır. Uç çıkarma düğmesine basılarak uçlar mikropipetten kolayca çıkarılabilir.
- Hacim Göstergesi:Bu, aspire edilecek veya dağıtılacak sıvının hacmini gösterir.
- Uç Konisi:Uç konisi, uçlara uyum sağlar. Cihazin standart uçların çoğuyla uyumluluğunu arttırdığı için evrensel uç konisine sahip bir mikropipet tercih edilir.
Mikropipet Türleri
Çalışma prensibi: Piston aşağıdaki iki işlevi yerine getirir
- Hava Deplasmanlı Mikropipet:Bu tip mikropipet, havanın yer değiştirmesi prensibine göre çalışır. Hava cebi sırasıyla yukarı ve aşağı hareket ettikçe sıvı numunelerini aspire eden ve dağıtan bir pistondan oluşur. Pipetin iç mekanizması numune/sıvı ile doğrudan temas etmez. Bunun yerine, sıvıyı pipete çekmek ve pipetten dağıtmak için tek kullanımlık bir pipet ucu kullanılır.
- Pozitif Yer Değiştirme Mikropipeti:Bu mikropipetlerde, piston numune ile doğrudan temas halindedir. Pozitif yer değiştirmeli bir mikropipetteki tek kullanımlık uç, bir kılcal damardan ve sıvıyı doğrudan değiştiren bir pistondan (hareketli iç kısım) oluşan bir mikro şırıngadır.
Çalışma Mekanizması
- Mekanik Mikropipet:Bu mikropipetler, bir piston mili yay mekanizmasına dayalı olarak manuel olarak çalıştırılır.
- Elektronik Mikropipet:Elektronik bir mikropipet çoğunlukla otomatiktir. Sıvının aspire edilmesi ve dağıtılması, manuel piston presleme ve bastırma yerine tek dokunuşlu düğmeler ile gerçekleştirilir. Elektronik pipetler ayrıca genellikle kullanıcının cihazda pipetlerin çeşitli uygulama ihtiyaçlarını karşılamasını sağlayan özel programlar oluşturmasını sağlar.
Kanal Sayısı
- Tek Kanallı Mikropipet:Tek kanallı mikropipet, sıvıyı aspire etmek veya dağıtmak için tek bir kanala sahip olandır.
- Çok Kanallı Mikropipet:Çok kanallı bir mikropipet , sıvıyı aspire etmek veya dağıtmak için birden fazla kanala sahiptir. Yaygın olarak bulunan çok kanallı mikropipet çeşitleri 8 kanal, 12 kanal ve 16 kanaldır. Çok kanallı mikropipetler, büyük hacimli numunelerle çalışırken tek kanallı bir mikropipetin iş yükünü azaltır.
Hacim-Kapasite
Sabit Hacimli Mikropipet:Sabit hacimli bir mikropipette , aspire edilecek veya dağıtılacak sıvının hacmi sabit kalır. Bu mikropipetler, aynı hacimde sıvı birden çok kez dağıtılacağı zaman kullanılır.
Değişken Hacimli Mikropipet:Bu mikropipet, belirli bir minimum ve maksimum hacim aralığı ile birlikte gelir. Aspire edilecek veya dağıtılacak sıvının hacmi, kullanıcının ihtiyacına bağlı olarak (cihazın hacim aralığında) ayarlanabilir.
Mikropipetlerin Boyut, Aralık ve Teknik Özellikleri
Mikropipetler, 0.1 µl ila 10.0000 µl arasında değişen farklı hacimlerde mevcuttur. Tek kanallı değişken hacimli mikropipetlerin yaygın olarak kullanılan çeşitleri , ISO 8655-2 standardında belirtilen izin verilen hata limitleriyle birlikte aşağıda listelenmiştir .
Pipet kullanılarak aspire edilebilen / dağıtılabilen maksimum hacme bağlı olarak bazen P10, P20, P1000, P5000 pipetleri olarak anılırlar. Örneğin, 0.5-10ul’lik bir mikropipet, yaygın olarak bir P10 pipeti olarak adlandırılabilir.
| Seviye Aralığı (ul) |
sınıflandırma |
Artış (ul) |
Doğruluk (± %) |
Doğruluk (±ul) |
CV (± %) |
Özgeçmiş ( ± ul) |
| 0.2-2 | P2 | 0.002 | 2 | 0.04 | 1.2 | 0.024 |
| 0,5-10 | P10 | 0.02 | 1 | 0.1 | 0,5 | 0.05 |
| 2-20 | P20 | 0.02 | 0,8 | 0.16 | 0,4 | 0.08 |
| 5-50 | P50 | 0.1 | 0,8 | 0,4 | 0,4 | 0,2 |
| 10-100 | P100 | 0,2 | 0,6 | 0,6 | 0,2 | 0,2 |
| 20-200 | P200 | 0,2 | 0,6 | 1.2 | 0,2 | 0,4 |
| 100-1000 | P1000 | 1.0 | 0,6 | 6 | 0,2 | 2 |
| 500-5000 | P5000 | 10.0 | 0,6 | 30 | 0,2 | 10 |
| 1000-10000 | P10000 | 20.0 | 0,6 | 60 | 0,2 | 20 |
Mikropipet Nasıl Çalışır?
Hava deplasmanlı mikropipetler, piston tahrikli hava deplasmanıyla çalışır. Piston aşağı doğru bastırıldığında, mikropipet ucunda bulunan sıvının da uzaklaştırıldığı kuvvet nedeniyle mikropipet kovanındaki hava dışarı atılır .
Piston yukarı doğru hareket ettiğinde pistonun boş bıraktığı boşlukta bir vakum oluşur. Bu, boş alanı doldurmak için uçtan gelen havanın yükselmesine neden olur ve daha sonra uç havasının yerini uca çekilen sıvı alır.
Pozitif yer değiştirme mikropipetleri, piston tahrikli yer değiştirme ile çalışır. Pozitif yer değiştirmeli bir mikropipetteki piston sıvı ile doğrudan temas halindedir. Piston aşağı doğru bastırıldığında mikropipetin kılıfında bulunan sıvı da aşağı doğru hareket eder ve uçtan dışarı atılır. Piston yukarı doğru çekildiğinde beraberinde sıvıyı da yukarı doğru çeker.
Hava Deplasmanlı Mikropipet Kullanma:
Sıvının hassas ölçümü, doğru mikropipet kullanımına bağlıdır. Hava yer değiştirme mikropipetleri, ortak hava yer değiştirme prensibi üzerinde çalışır. Başparmak bir pistona bastırılır ve serbest bırakılırken sıvı tek kullanımlık bir uca çekilir. Pistona tekrar basıldığında, sıvı dağıtılır. Bu adımlar arasında, sıvı dağıtım sürecini daha hassas hale getirmeye yardımcı olan birkaç küçük adım vardır.
Bazı mikropipetler sabit hacimde sıvı sağlar. Bununla birlikte, çoğunluğu değişken ses ayarı ile ayarlanabilir. Değişken hacimli mikropipet , farklı aralıklar ve üst ve alt ölçüm limitleri ile birlikte gelir. Bu gibi durumlarda hata yüzdesi ölçülen sıvıya göre değişebilir. Aralığın alt değerinden daha az dağıtmaya çalışmak, üst aralığın üzerinde dağıtmaya çalışmak ucu tamamen dolduracak ve sıvının pipet gövdesine girmesine izin verecek şekilde hatalı sıvı ölçümlerine neden olacaktır.
Mikropipetin Temizlenmesi, Bakımı ve Saklanması
Mikropipetin bakımı ve temizlenmesi laboratuvarlarda önemli bir rutindir. Uygun bir bakım programı uygulamak, bu pahalı ekipmanın yeni satın alınmasının maliyetini azaltabilir. Mikropipetin temizlenmesi zaman, odaklanma ve pratik gerektirir; aksi takdirde mikropipet zarar görebilir. Bu nedenle, temizlik sırasında mikropipetin dikkatli kullanılması önemlidir. Aşağıda, mikropipetlerin uygun şekilde temizlenmesi için kapsamlı bir kılavuz yer almaktadır.
Dış Temizlik: Pipetin çoğu, tipik laboratuvar temizlik maddeleri, sabunlar veya alkol ile dışarıdan temizlenebilir. Tam sterilizasyonu sağlamak için, silmeden önce temizleme solüsyonunu mikropipet üzerinde 10-15 dakika bekletin.
İç Temizlik: Mikropipetin içinin temizlenmesi, tam olarak sökülmesini gerektirdiğinden daha fazla zaman alabilir. Ayrıca, örneklemede kullanılan sıvıya bağlı olarak mikropipetin her parçasının uygun şekilde temizlenmesi gerekecektir.
– Mikropipetin belirli yönü için talimat kılavuzuna bakın
– Temizleme solüsyonu ve damıtılmış su içeren bir pamuklu çubuk kullanın
– Satın alırken sağlanan yağlayıcı ile pistonları hafifçe gresleyin
– Tüm parçaları yeniden birleştirin ve mikropipetin düzgün çalıştığından emin olmak için kontrol edin.
Kontaminasyon Temizleme: Mikropipet bilinen bir madde ile kontamine olursa, maddenin tipine bağlı olarak yapılması gereken özel temizleme adımları vardır. Mikropipet çapraz kontamine ise yukarıdaki temizleme rutini yeterli olmayacaktır.
| Çözüm Türleri | Temizleme işlemi |
| Sulu çözeltiler, organik çözücüler ve proteinler için | Kirlenmiş parçaları damıtılmış su veya yüzde 70 etanol ile durulayın ve yaklaşık 16°C sıcaklıkta bekletin. |
| Enfeksiyöz sıvılar için | Alt kısmı 120°C sıcaklıkta 15-20 dakika otoklavlayın, ardından yeniden birleştirmeden önce oda sıcaklığında dönmesine izin verin. |
| Radyoaktif maddeler için | Pipeti Decon gibi bir solüsyona yerleştirin ve ardından durulayın ve havayla kurutun. |
| nükleik asitler için | Mikropipetin alt kısımlarını glisin/HCl tamponu (pH2) içinde 10 dakika kaynatın, damıtılmış su ile durulayın ve havayla kurutun. |
Bakımlı ve temiz bir pipet , laboratuvarın tehlikeli çözeltilere karşı güvenliğini sağlar. Pipeti daha doğru, güvenilir, uzun ömürlü hale getirir ve numune alma maliyetini düşürür.
Mikropipetlerin uygun şekilde saklanması, temizlenmesi ve kalibre edilmesi kadar önemlidir. Mikropipet ve aksesuarları temiz, serin ve kuru bir yerde saklanmalıdır. Depolama yerinin sıcaklığı -20 °C ila 50 °C (-4 °F ila 120 °F) arasında ve bağıl nem %5 ila %95 arasında olmalıdır. Unutulmaması gereken bir diğer nokta ise aletin dik konumda saklanması gerektiğidir.
Kullanılan Farklı Pipetleme Teknikleri Nelerdir?
Sık kullanılan pipetleme teknikleri, ileri pipetleme ve ters pipetlemeyi içerir. Bu teknikleri ayrıntılı olarak anlamadan önce, aşağıda listelenen genel pipetleme talimatları dikkate değer olacaktır.
- Özellikle yüksek viskoziteli reaktifler/çözeltiler ile çalışırken, pistona her zaman yavaşça basın ve bırakın. Pistonun kırılmadığından emin olun.
- Ucun uç konisine sıkıca takıldığından emin olun.
- Deneyinize başlamadan önce, pipetleyeceğiniz reaktif veya solüsyon ile ucu 2-3 kez doldurup boşaltın.
- Aspirasyon sırasında mikropipet dik konumda tutun. Grippy işaret parmağınızın üzerinde durmalıdır.
- Uçların, mikropipetin ve reaktif/solüsyonun aynı sıcaklıkta olduğundan emin olun.
Mikropipet Nasıl Kalibre Edilir?
Mikropipet kalibrasyonu , doğru ve hassas pipetleme sonuçları için herhangi bir laboratuvar rutininin çok önemli bir parçasıdır. Örneklemenin doğruluğunu sağlamak için, pipet kalibrasyonunu her ay veya birkaç ay arayla kontrol etmek önemlidir. ISO 8655 standardına göre uygun bir mikropipet kalibrasyonu gerçekleştirmek için özel ortam koşulları gerekir. Hava basıncı, nem, sıcaklık ve hatta yükseklik gibi faktörler pipetleme sonuçlarını etkiler. Aşağıdaki metin, gerekli malzeme veya ekipmanı ve bir mikropipet kalibrasyonunu gerçekleştirmek ve kontrol etmek için ihtiyacınız olan tüm adımları açıklamaktadır.
Mikropipeti kalibre etmek için ihtiyaç duyacağınız şeylerin bir listesi:
- Kalibre edilmesi gereken mikropipet ve uçlar
- Arıtılmış su
- Temiz Beher
- Termometre
- Sıcaklık ile Damıtılmış Su Yoğunluk Tablosu
- En az 0,0001 g okunabilirliğe sahip Yarı Mikro Terazi
- Sonuçları yazmak için defter
- Hesap makinesi